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其林貝爾

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膠原蛋白提取手藝優化(其林貝爾TS-200使用)

返回列表 來源:未知 發布日期:2020-03-06 09:12【

1 材料與方法 


1.1 材料與試劑 


秘魯魷魚皮 北京市北水嘉倫水產品市場有限責任 公司。 氫氧化鈉、正丁醇、冰乙酸、氯化鈉、四甲基乙 二胺、過硫酸銨、考馬斯亮藍R-250(均為分析純) 國藥集團化學試劑有限公司;30 g/100 mL聚丙烯酰 胺儲備液、1.0 mol/L Tris-HCl(pH 6.8)、1.5 mol/L Tris-HCl(pH 8.8)、10 g/100 mL十二烷基硫酸鈉 (sodium dodecyl sulfate,SDS)溶液、5×Tris-甘氨酸 電泳緩沖液(含0.125 mol/L Tris、1.25 mol/L甘氨酸、 0.5 g/100 mL SDS)、5×SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳 (SDS-polyacrylamide gel electropheresis,SDS-PAGE) 蛋白上樣緩沖液(含10 g/100 mL SDS、0.25 mol/L Tris-HCl(pH 6.8)、體積分數50%甘油、0.5 g/100 mL溴 酚藍、5 g/100 mL β-巰基乙醇) 北京蘭杰柯科技有限 公司;蛋白Marker(11~245 kDa) 北京索萊寶科技 有限公司。 


1.2 儀器與設備 


DZF-6050真空干燥箱 北京萊凱博儀器設備有 限公司;Milli-Q超純水系統 默克密理博實驗室設備 (上海)有限公司;Sorvall LYNX-6000離心機 美國 賽默飛世爾科技公司;UV-2800紫外-可見分光光度計 美國尤尼柯公司;DYCZ-24KS凝膠電泳槽 北京六一 生物科技有限公司;PowerPac Universal電泳儀電源、 Gel Doc XR+凝膠成像儀(配Image Lab Software) 美國Bio-Rad公司;TS-200搖床 海門市其林貝爾儀器制造有限公司;XploRA Plus拉曼光譜儀 日本 Horiba公司;Q200差示掃描量熱(differential scanning calorimetry,DSC)儀 美國TA公司。


1.3 方法


水分含量測定:參照GB 5009.3—2016《食品安全國 家標準 食品中水分的測定》;蛋白質含量測定:參照 GB 5009.5—2016《食品安全國家標準 食品中蛋白質的測定;脂肪含量測定:參照GB 5009.6—2016《食品 安全國家標準 食品中脂肪的測定》;灰分含量測定: 參照GB 5009.4—2016《食品安全國家標準 食品中灰分 的測定》。參考Matmaroh等的方法,取適量秘魯魷魚皮用超 純水沖洗干凈,在4 ℃條件下,以液料比20 mL/g加入 0.1 mol/L NaOH溶液浸泡20 h,以除去秘魯魷魚皮中的非 膠原蛋白;然后用超純水沖洗秘魯魷魚皮至pH值中性, 瀝干后,以液料比10 mL/g加入10 g/100 mL正丁醇溶液, 攪拌浸泡20 h,以除去秘魯魷魚皮中的脂肪,然后用超純 水沖洗魷魚皮至中性,瀝干,備用。


2 結果與分析


秘魯魷魚皮中含有大量水分,其次是蛋 白質,約占干物質的90%,這與魏薇薇等的闡述一致。 通過GB/T 9695.23—2008《肉與肉制品 羥脯氨酸含量測 定》測得秘魯魷魚皮中羥脯氨酸的含量為1.17%,膠原蛋 白含量為12.99%,占蛋白質總量的70.75%,可見秘魯魷 魚皮中膠原蛋白含量較高,是一種提取水產膠原蛋白的 優質原料。隨著液料比的增加,ASC提取率逐漸 上升。液料比10~20 mL/g時,ASC提取率增加明顯;液 料比高于20 mL/g時,ASC提取率增加緩慢,提取率為 25.40%~26.14%。因此,選擇液料比為15、20、25 mL/g 進行響應面試驗。


3 結 論 


以秘魯魷魚加工副產物魷魚皮為原料,以ASC提取 率為指標,對冰醋酸濃度、液料比和浸泡時間進行單因 素試驗和響應面試驗優化,得到秘魯魷魚皮ASC最佳提 取工藝。通過紫外全波長掃描、SDS-PAGE、拉曼光譜 及DSC測定提取的ASC特性,發現采用最佳工藝提取的 ASC屬于典型的Ⅰ型膠原蛋白,含有α1、α2和β鏈,且 蛋白結構完整,三螺旋結構未被破壞,其熱變性溫度為 50.07 ℃。本研究可為制備水產膠原蛋白包裝材料提供理 論依據,并為秘魯魷魚皮進一步加工利用提供參考,進 而提高秘魯魷魚副產物價值,減少資源浪費。






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